조직 처리 소개

"조직 처리" 는 고정 단계에서 적절한 조직 학적 왁스로 충분히 침투 된 상태까지 동물 또는 인간 조직을 준비하는 일련의 필요한 단계를 의미합니다. 마이크로 톰에 절개 할 수 있습니다.

조직 처리의 중요성

실험실 관리자는 종종 직원에게 조직 처리의 중요성을 강조합니다. 부적절한 처리 스케줄을 사용하거나 근본적인 오류 (예: 시약의 잘못된 보충 또는 시퀀싱) 를 만들면 조직 표본이 절개되지 않을 수 있음을 이해하는 것이 중요합니다. 즉, 유용한 시각적 정보를 제공하지 않습니다. 이 상황은 전체 표본이 단일 배치로 처리되기 때문에 인간 진단 조직에서 특히 심각합니다. 이러한 경우 조직이 손상된 경우 추가 분석을 위해 사용할 수있는 예비 조직이 없을 수 있으므로 실험실에서 진단 할 수없는 이유를 환자에게 설명해야하는 상황이 발생할 수 있습니다. 기계적 또는 전기적 고장자동 조직 가공 기계대부분의 처리 문제는 사람의 오류로 인해 발생할 수 있습니다. 따라서 조직 처리 담당자를위한 적절한 교육 및 훈련의 중요성을 강조하는 것이 중요합니다. 최상의 결과를 보장하기 위해 모든 실행을 위해 처리 프로그램을 설정할 때주의를 기울여야합니다.

파라핀 섹션 조직 처리 단계 개요

1. 신선한 샘플 수집

신선한 조직 샘플은 다양한 출처에서 나오며 환자 또는 실험 동물에서 제거 할 때 손상되기 쉽습니다. 따라서 해부 후 가능한 한 빨리 조심스럽게 처리하고 고정해야합니다. 이상적으로, 고정은 수술실과 같은 추출 부위에서 이루어져야합니다. 이것이 가능하지 않으면 실험실에 도착하자마자 즉시 고정해야합니다.

2. 고정

표본은 포르말린과 같은 포름알데히드 용액과 같은 액체 고정제에 담겨있다. 이 약제는 점차적으로 조직에 침투하여 조직을 경화시키고 보존하는 화학적 및 물리적 변화를 유도하면서 후속 처리 단계 동안 조직을 보호합니다. 이 작업에 적합한 특정 특성을 가져야하기 때문에 몇 가지 시약 만 고정에 적합합니다. 예를 들어, 조직 성분은 특정 염색 기술을 나중에 적용하기 위해 특정 화학적 반응성을 유지해야 한다. 포르 말린 (일반적으로 인산염 완충) 은 파라핀 섹션으로 가공 될 조직을 보존하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 고정제입니다. 이상적으로, 표본은 모든 조직 부분에 침투하기에 충분히 오랫동안 고정 용액에 남아 있어야하고, 그 다음에 고정 화학 반응이 평형화 될 수있는 기간 (고정 시간) 이 있어야합니다. 일반적으로 표본의 고정 시간은 6 ~ 24 시간이어야합니다. 대부분의 실험실은 고정 단계를 처리 프로그램의 첫 번째 단계로 간주합니다. 고정 후, 표본은 평가를 위해 적절한 영역을 선택하기 위해 추가 해부를 요구할 수 있습니다. 가공 된 표본은 다른 표본과 구별하기 위해 적절하게 라벨이 지정된 카세트 (작은 천공 바구니) 에 넣습니다. 표본 취급의 기간은 가장 크고 작은 표본, 사용된 특정 처리기, 선택된 용매, 용매 온도 및 다른 변수의 크기 및 유형에 의존한다.

3. 탈수

용융 된 파라핀 왁스는 소수성이기 때문에 (물과 잘 섞이지 않음) 왁스 침투 전에 샘플에서 대부분의 물을 제거해야합니다. 이 방법은 일반적으로 샘플을 농도가 증가하는 일련의 에탄올 (알코올) 용액에 담그고 절대 에탄올로 절정에 이릅니다. 에탄올은 모든 비율로 물과 혼합하여 시료의 물을 알코올로 점차적으로 대체 할 수 있습니다. 점차적으로 증가하는 농도 서열을 사용하면 과도한 조직 변형을 최소화합니다.

4mm 보다 두껍지 않은 샘플의 경우 일반적인 탈수 순서는 다음과 같습니다.

70% 에탄올 15 분

90% 에탄올 15 분

100% 에탄올 15 분

100% 에탄올 15 분

100% 에탄올 30 분

100% 에탄올 45 분

이 시점에서, 최소량의 단단히 결합된 (분자) 물을 제외한 모든 샘플의 물이 제거되어야 한다.

4. 청산

유감스럽게도 조직의 수분 함량이 최소화되었지만 왁스와 에탄올이 잘 섞이지 않기 때문에 여전히 왁스로 침투 할 수 없습니다. 따라서, 에탄올 및 파라핀 왁스와 양립할 수 있는 중간 용매가 사용되어야 한다. 이 용매는 조직 내의 에탄올을 대체할 것이고, 이어서 용융된 파라핀 왁스로 대체될 것이다. 프로그램의이 단계를 "클리어링" 이라고하며 사용 된 화학 물질을 "클리어링 에이전트" 라고합니다. "클리어링 (clearing)" 이라는 용어는 상대적으로 높은 굴절률로 인해 많은 (전부는 아님) 클리어링 작용제가 조직에 어느 정도의 광학적 투명도 또는 투명도를 제공할 수 있기 때문에 선택되었다. 또 다른 비판적제거제의 기능은 지방이 왁스 침투를 방해하기 때문에 조직에서 다량의 지방을 제거하는 것입니다.

자일렌은 일반적으로 사용되는 제거제로 에탄올을 완전히 대체하기 위해 여러 가지 변화가 필요합니다.

4mm 보다 두껍지 않은 표본의 경우, 전형적인 클리어링 서열은: 자일렌 20 분, 또 다른 20 분, 자일렌 45 분을 포함한다.

5. 왁스 침투

이 단계에서 조직은 적절한 조직 학적 왁스로 침투합니다. 많은 상이한 시약이 이러한 과제를 달성하기 위해 수년에 걸쳐 평가되고 사용되었지만, 파라핀-기반 조직학적 왁스는 여전히 가장 널리 사용된다. 표준 왁스는 60 ℃에서 액체로 남아 있고, 이 온도에서 조직에 도입될 수 있고, 이어서 20 ℃로 냉각되어 일관된 절단에 적합한 질감으로 응고될 수 있다. 이들 왁스는 정제된 파라핀 및 스티렌 또는 폴리에틸렌과 같은 수지를 포함하는 다양한 첨가제로 구성된다. 이러한 구성 요소는 왁스가 2 미크론만큼 좁은 얇은 조각으로 절단되고 마이크로 톰에서 절단 될 때 리본을 형성 할 수 있도록 특정 물리적 특성을 가지고 있음을 이해하는 것이 필수적입니다. 따뜻한 수조에 떠있을 때 평평하게 유지하기에 충분한 유연성을 유지하십시오.

4mm 보다 두껍지 않은 샘플의 경우 일반적인 침투 순서는 다음과 같습니다.

왁스 30 분

왁스 30 분

왁스 45 분

6. 임베딩 또는 차단

일단 표본이 왁스로 완전히 침투되면, 그들은 절단을 위해 마이크로톰에 장착될 "블록" 으로 성형될 필요가 있다. 이 과정은 용융 된 왁스가 곰팡이에 부어지고 표본이 그 안에 배치되는 "임베딩 센터" 를 사용하는 것을 포함합니다. 표본의 위치가 "절단의 평면" 을 지시하기 때문에 금형 내의 표본의 적절한 방향에 특별한주의를 기울이는 것이 중요합니다. 진단 및 연구 조직학에 필수적입니다. 그런 다음 임베딩 링을 몰드의 상단에 놓고 더 많은 왁스가 추가되고 전체 어셈블리가 콜드 플레이트에 배치되어 응고됩니다. 이 과정이 완료되면 부착 된 삽입 링과 함께 조직 블록을 곰팡이에서 제거하여 미세 절제술을 준비 할 수 있습니다. 조직 처리가 올바르게 수행되면 조직 표본을 포함하는 왁스 블록이 내구성이 뛰어나고 필수 보관 재료로 사용될 수 있다는 점은 주목할 가치가 있습니다.